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肿瘤基因功能研究锦囊

实验原理

肿瘤是一种多发性、多因素诱发的复杂疾病,正常细胞/ 组织与肿瘤细胞/ 组织之间往往存在着大量差异表达基因,这些差异表达基因的作用机制研究便是肿瘤精准医学研究中的核心。

研究流程

研究流程

基因筛选

查阅文献、数据库分析、测序/芯片分析、细胞系检测等手段筛选出差异基因,可以是mRNA、miRNA、LnRNA等等,通过改变基因在细胞内的表达,研究其对细胞表型的影响、以及作用机制。常见的方式有干扰、过表达、突变,可通过构建相应的载体或基因编辑技术来实现。

基因筛选

细胞表型研究

差异基因对肿瘤功能影响的研究。过表达或干扰差异基因表达,检测其表达改变对细胞表型的影响,进而确定差异基因对肿瘤细胞表型产生的作用;主要有细胞增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭、耐药、能量代谢检测等。一般通过正、反两种实验来验证细胞表型的改变,并且在2个细胞株中开展实验。

结果展示

结果展示

分子机制研究

根据细胞表型的改变,研究经典的信号通路与差异基因之间关系,筛选出一些关键的明星分子,检测其表达变化以及对信号通路的调节方式。 也可通过成本高一点的基因/蛋白芯片来筛选一些明星分子,验证其作用机制。

分子机制研究

动物实验检测验证

肿瘤研究中最常用的是裸鼠模型,建立皮下移植瘤模型,再将基因导入动物体内,观察裸鼠体内肿瘤的生长情况,也可进一步分析与差异基因相关的分子机制或信号通路,为后期肿瘤基因临床治疗提供潜在的靶点。

动物实验检测验证

临床样本的验证及临床意义

最后,在大量临床样本中验证差异基因的表达。分析其与肿瘤进展如病理分期、复发、转移、预后等的相关性,确定我们所关注的差异基因对临床研究的价值。

临床样本的验证与临床意义


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