消光系数
实验背景
消光系数为在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸光度。被测溶液浓度高，溶液显色后颜色深，对光吸收大，光透射率低，反之就小。消光系数是蛋白产品特有的常数，也是ICH Q6B建议建立的相关标准的基础。消光系数可以通过对相应蛋白的氨基酸分析结果计算得出，也可以通过蛋白序列信息获取。虽然后者较为方便快捷，但实际应用中也有局限。由于重组蛋白类药物大部分是基因工程技术得到的融合蛋白或者突变体，其吸光系数无法查到；且在蛋白成品药物中，辅料和添加剂的加入可使得样品的pH值发生变化，影响酪氨酸残基的离子态，进而影响蛋白的吸光度。所以，想要得到准确的消光系数，常采用氨基酸分析法。
本实验对蛋白质样品进行酸水解处理，断开高级结构和肽键，得到游离的氨基酸。再使用Agilent自动衍生系统及衍生试剂对氨基酸进行柱前衍生，得到氨基酸定量结果。再根据朗伯-比尔定律及未水解蛋白样品的紫外吸收值计算得出消光系数值。
适用样本
蛋白类样品为主
主要设备
Aglient/1260 InfinityⅡ hplc等液相系列
送样要求
建议提供≥2mg的目标成分，额外提供10ml以上的空白buffer。
如样品含有复杂辅料成分，需要跟对应商务沟通后确认具体送样要求。
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